Care este tehnica microscopiei preparatelor colorate. Îmbunătățirea microscopului și dezvoltarea tehnologiei microscopice la începutul secolului XX. Detectarea biopolimerilor în obiecte biologice
Familiarizarea cu microscopul frotiurilor.
Microscoapele sunt utilizate pentru a studia morfologia microorganismelor. Microscopul biologic (Fig. 1) este a instrument optic, crește obiectele de 1000-15000 de ori și constă din sisteme mecanice, optice și de iluminat.
Sistemul mecanic include un picior în formă de potcoavă, suport pentru tub, tub, etapă, șuruburi. Sistemul optic include lentile și oculare. Sistemul de iluminare este format dintr-un condensator cu diafragmă și oglindă.
Suportul tubului și baza în formă de potcoavă (picior) sunt conectate în mod mobil printr-o balamală. Tub - telescop un microscop. Un ochi este introdus în partea superioară a tubului și este introdus un revolver care se rotește în jurul axei sale, în care se înșurubează lentilele. Tubul se mișcă în sus și în jos cu ajutorul șuruburilor pentru micrometru și micrometru. O rotație a șurubului micrometrului deplasează tubul cu 0,1 mm. Prin urmare, microscopul este utilizat pentru o precizare mai precisă, și pentru cea preliminară, cu macroscrew. Tabelul cu subiect este destinat pentru plasarea materialului studiat. Masa poate fi deplasată în diferite direcții cu șuruburi.
Condensatorul este format din lentile care colectează razele reflectate din oglindă într-un fascicul puternic de lumină și îl direcționează prin deschiderea etapei obiectului către pregătire. La determinarea mobilității preparatelor nevopsite, condensatorul ar trebui să fie ușor omis.
Diafragma este situată între oglindă și condensator și servește la controlul cantității de lumină care intră în condensator.
Obiectivul este format dintr-un sistem de lentile închise într-un cadru metalic. Obiectivul frontal servește pentru a mări subiectul, restul - pentru a corecta imaginea. Obiectivul oferă o imagine reală, mărită, inversă.
Microscoape biologice moderne au cel puțin trei lentile. Lentilele uscate sunt mărite de 8 și 40 de ori (există un strat de aer între lentile și preparat), cu imersiune - de 90 de ori. Un cadru care indică mărirea este aplicat pe cadrul fiecărui obiectiv. Microscopia preparatelor colorate folosește o lentilă de imersie, cufundând lentila frontală într-o picătură de ulei de cedru depus pe o lamelă de sticlă cu bacterii colorate. Datorită acestui fapt, toate razele de la iluminator, fără a-și schimba direcția, cad în obiectiv și se obține o imagine clară.
Ocularul este format dintr-o lentilă colectivă superioară - oculară și inferioară. În partea superioară a ocularului există un număr care indică creșterea (7, 10, 15). Ocularul mărește doar imaginea. Mărirea totală a microscopului este suma produsului creșterii lentilei și creșterea ocularului.
Principiul de funcționare al unui microscop luminiscent se bazează pe capacitatea de obiecte individuale și coloranți de a străluci atunci când sunt iluminate cu raze ultraviolete. Microscoape luminescente sunt echipate cu o sursă de lumină ultravioletă și un set de filtre de lumină. La bacterii, propria lor fluorescență este foarte slab exprimată. Prin urmare, este necesar să le prelucrăm cu vopsele fluorescente (fluorocrom), care colorează elementele structurale ale celulei în diverse culori.
Principiul funcționării unui microscop electronic se bazează pe utilizarea unui flux de electroni obținut dintr-un pistol cu \u200b\u200belectroni în loc de raze de lumină. Toate lentilele optice sunt înlocuite cu bobine electromagnetice, creând un câmp electromagnetic care controlează mișcarea electronilor. Un microscop electronic mărește un obiect de 50-50 de mii de ori. Medicamentele destinate cercetării sunt preparate pe pelicule subțiri de colodie. Obiectul investigat este plasat pe calea fluxului de electroni, care este reflectat pe ecranul luminiscent. Imaginea obiectului poate fi fotografiată de un dispozitiv montat la microscop. Folosind microscopie electronică, puteți studia în detaliu structura bacteriilor, virusurilor și bacteriofagului.
Este recomandabil să așezați desktopul pentru microscopia preparatelor pe fereastră. Microscopul este instalat pe desktop cu un suport de tub la sine la aproximativ 7-10 cm de la margine. În primul rând, iluminarea este configurată, în acest scop o oglindă direcționează un fascicul de lumină de la sursa de lumină către obiectiv cu o creștere de 8 ori.
Cu setări de iluminare adecvate, câmpul de vedere al microscopului trebuie să fie sub forma unui cerc iluminat uniform. După aceea, medicamentul de testat este plasat pe scena, care este fixat cu terminale și examinat la microscop folosind lentile cu o creștere de 8, 40 sau 90 de ori.
Când lucrați cu lentile 8 și 40, tubul microscopului este coborât cu grijă cu un șurub macroscopic, obiectivul este apropiat de preparat, dar nu îl atinge. Respectați ocularul, ridicând ușor tubul cu același șurub până obțineți o imagine. Cu ajutorul unui șurub micrometru, obiectivul este reglat cu precizie până când se obține o imagine clară a obiectului.
Când lucrați cu o lentilă de imersiune (creșterea de 90 de ori), se aplică preliminar o picătură de ulei de imersiune pe preparat, apoi, sub controlul ochiului, obiectivul este coborât într-o picătură de ulei cu un șurub macroscopic. Instalarea exactă a medicamentului în focalizarea lentilei se realizează cu ajutorul unui șurub micrometru, care poate fi rotit jumătate de rotație.
La sfârșitul lucrării materialul studiat este scos de pe scenă. Folosind o cârpă moale umezită cu alcool sau eter, uleiul de imersie este îndepărtat din lentilă, condensatorul este coborât ușor, obiectivul este montat și microscopul este pus în carcasă sau depozitat sub un capac de sticlă care îl protejează de praf și umiditate.
Instituție educațională
Lucrări de laborator nr. 1
verificat
Lector superior
____________ Titenkova N.I.
„__” _________ 2011
Efectuat
Grupul de studenți TET-101
____________ Lobkova M. Yu.
„__” _________ 2011
Mogilev 2011
Ministerul Educației al Republicii Belarus
Instituție educațională
UNIVERSITATEA DE STAT MOGILEV
DEPARTAMENTUL „TEHNOLOGII ALIMENTARE”
Laborator microbiologic. Tehnica microscopului și microscopului
Lucrări de laborator nr. 1
Specialitatea 1-25010901 "Cercetarea mărfurilor și examinarea produselor alimentare"
verificat
Lector superior
____________ Titenkova N.I.
„__” _________ 2011
Efectuat
Grupul de studenți TET-101
____________ Șevțova E.N.
„__” _________ 2011
Mogilev 2011
MUNCA DE LABORATOR nr. 1
Laborator microbiologic. Tehnica microscopului și microscopului
Scop: Familiarizarea studenților cu scopul, dispozitivul, echipamentul și modul de operare al laboratorului microbiologic; stăpânind tehnica microscopiei preparatelor microbiologice.
Întrebări de testare:
- Scopul laboratorului microbiologic, dispozitivul și echipamentul său.
Studiile microbiologice sunt efectuate în camere speciale numite laborator microbiologic. Laboratorul microbiologic include mai multe camere:
1 - sala de laborator pentru cercetare;
2 - încăpere pentru prepararea mediilor nutritive;
3 - cameră pentru spălarea vaselor (spălare);
4 - cameră pentru sterilizarea vaselor, a substanțelor nutritive
(Sterilizare);
5 - box - o cameră izolată pentru muncă care necesită un grad ridicat de sterilitate. Pentru aceasta, aerul și alte obiecte din el sunt dezinfectate înainte de lucru.
echipament laborator microbiologic
Echipamentele de laborator microbiologic includ instrumente optice (microscopuri, lupi), instrumente termice (termostate, autoclave, aparate Koch, cuptoare de uscare, frigidere, microbiologice (ace bacteriologice, bucle, spatule) și instrumente chirurgicale (scalpele, pensete, suporturi, foarfece), precum și epruvete, vase Petri, folii de acoperire și lamele, tuburi de sticlă, picurate cu coloranți. Laboratorul necesită medii nutritive (agar de nutrienți uscați, mediu Kessler, mediu Endo), agar agar, ina, coloranți analitici (fuchsin, violet gențian, albastru de metilen, albastru de metilen), acizi diferiți, alcaline, sodă.
Figura 1 - Bucate microbiologice: a - farfurie Petri; b - diapozitiv de sticlă; înveliș din sticlă; g - ac microbiologic; d - bucla microbiologică; e- spatula Drigalski.
- Cum să fie echipat la locul de muncă microbiolog?
- Care sunt metodele de cercetare microbiologică și care dintre ele sunt utilizate pentru analiza microbiologică a produselor alimentare?
- bacterioscopic (microscopic) - studiul utilizând un microscop al formei și structurii microorganismelor;
- bacteriologic - studiul culturilor de microorganisme prin cultivare, adică cultivarea pe medii nutritive artificiale;
- experimentale - determinarea microorganismelor și a otrăvurilor lor prin infecția animalelor experimentale (șoareci, șobolani albi, cobai) cu acestea. Este cel mai adesea folosit pentru a identifica agentul cauzal al intoxicațiilor alimentare;
- serologic - determinarea microorganismelor folosind seruri de sânge care conțin anticorpi. Această metodă este utilizată pe scară largă în microbiologia medicală.
În analiza microbiologică a produselor alimentare, se folosesc primele două tipuri de studii. Metoda de cercetare bacteriologică determină caracteristicile culturale (dimensiunea, forma, structura, culoarea, luciul, profilul unei singure colonii) și caracteristicile biochimice ale microorganismelor (capacitatea de a fermenta o substanță care face parte din diverse medii nutritive). În timpul examinării bacterioscopice, sunt determinate trăsăturile morfologice (mărimea, forma, etc.) ale microorganismelor individuale și capacitatea lor de a fi colorate cu diverși coloranți (proprietăți tinctoriale). Deoarece în natură există mulți microbi gemeni, care au aspect similar unul cu celălalt, prin urmare, pentru a determina tipul de microorganisme, o bacterioscopie nu este de obicei suficientă, este necesar să se utilizeze metoda bacteriologică de cercetare.
- Care sunt regulile de lucru în laboratorul de microbiologie?
Când lucrați într-un laborator microbiologic, trebuie respectate următoarele reguli:
a) să fie în laborator și să lucreze în el într-un halat;
b) să utilizeze un loc de muncă permanent;
c) monitorizează comanda la locul de muncă, nu păstrează pe ea obiecte străine;
d) penseta, spatule, bucle și ace microbiologice, pipete, după ce au lucrat cu microorganisme, arde în flacăra unei lămpi cu alcool sau se cufundă într-un vas cu o soluție dezinfectantă (cloramină, disol, acid carbolic);
e) toate materialele utilizate cu microorganisme - preparate de deșeuri din culturi vii, preparate temporare etc. - neutralizează mai întâi cu sterilizarea sau dezinfectarea și abia apoi se spală;
f) la sfârșitul cursurilor, faceți ordine la locul de muncă, îndepărtați halatele de baie și apoi spălați-vă pe mâini.
În laborator interzise:
a) să fie în pălării și haine exterioare;
b) lucrează fără halate;
c) mananca, bea apa, fumeaza;
d) pune obiectele străine pe mese;
e) atinge cu mâinile nespălate fața;
f) să evite mersul inutil, mișcări bruște, tirajuri, contribuind la contaminarea materialului de testat prin microflora străină.
5) Descrieți dispozitivul microscopului de imersiune biologică.
Majoritatea microorganismelor sunt măsurate în microni sau micrometri (1 μm \u003d 1? 10 -6 și \u003d 1? 10 -3 mm), prin urmare, este posibil să le luați în considerare și să le studiați doar cu ajutorul unor instrumente optice speciale - microscopuri.
Principiul funcționării unui microscop de imersiune biologică este obținerea unei imagini inverse valide a unui obiect în lumină transmisă sau artificială.
Trei părți se disting la microscop - mecanic, optic și iluminat (vezi Fig. 1).
Partea mecanică, sau trepied, constă din partea de susținere - baza microscopului 1 și suportul 2 al tubului, pe care se montează stadiul obiectului 3, suportul condensatorului 4 și oglinda (sau iluminatorul) 5, iar în partea superioară - capul 6, tubul înclinat 7 și revolverul 8 cu lentile.
Tabelul obiect servește la fixarea pe el a subiectului (preparatului) în cauză, acesta poate fi mutat pe un plan orizontal cu ajutorul șuruburilor 9.
Figura 2- Microscop "Biolam R 1U4.2"
Focalizarea medicamentului se realizează prin mișcarea tubului folosind un mecanism care este acționat de două șuruburi - macrometrul 10 (focalizare brută) și micrometrul 11 \u200b\u200b(focalizare fină). Cu o rotire a șurubului micrometrului, tubul se mișcă 0,1 mm. Când șuruburile sunt rotite în sensul acelor de ceasornic, tubul microscopului este coborât, iar rotit în sens invers acelor de ceasornic se ridică.
Atenţie! Șurubul micrometrului este una dintre cele mai fragile părți ale microscopului și ar trebui manipulat cel mai atent!
Partea optică a microscopului este reprezentată de lentile 12 și ocular 13.
Obiectivul este partea principală a microscopului. Este format dintr-un sistem de lentile închis într-un cadru metalic. Creșterea lentilei depinde de distanța focală a obiectivului frontal - singura lentilă care dă o creștere. Cu cât curbura obiectivului frontal este mai mare, cu atât distanța focală este mai scurtă și cu atât mai mare este obiectivul. Lentilele de corelație situate deasupra acesteia sunt proiectate pentru a obține o imagine mai clară (eliminând defectele de imagine - aberații sferice și cromatice). Mărirea pe care o dau lentilele este indicată de numerele din cadrul lor.
În funcție de gradul de mărire dat, lentilele sunt împărțite în lentile de mărimi mici, medii și mari.
6) Cum se determină mărirea totală a microscopului?
Mărirea totală a microscopului este determinată de produsul de mărire a lentilelor și de mărirea ocularului. De exemplu, dacă mărirea obiectivului este 90 x, iar ocularul este 15 x, atunci mărirea totală este de 1350 x.
Dispozitivul de iluminat este amplasat sub tabelul subiectului. Scopul său este de a lumina câmpul de vedere al medicamentului. În dispozitivul de iluminare se distinge o oglindă sau un iluminator și un condensator cu diafragmă 14 iris.
Un condensator este un sistem de lentile puternice și servește pentru a spori luminozitatea iluminării obiectului în cauză. El colectează raze de lumină reflectate din oglindă într-un fascicul și le concentrează în planul medicamentului. Condensatorul se deplasează în direcția verticală cu ajutorul șurubului 15. Când condensatorul este coborât, câmpul vizual al microscopului se întunecă, iar când este ridicat, acesta este iluminat.
Irisul este situat sub condensator. Este format din segmente subțiri de metal care pot fi deplasate sau extinse cu ajutorul manetei, reglând astfel fluxul de lumină în condensator.
7) Ce sunt lentilele uscate și cu imersiune?
Lentilele de mărire mică (3 x 5 x 8 x 9 x 10 x) sunt utilizate în principal pentru examinarea preliminară a medicamentului. Lentile de mărire medie (20 x, 40 x, \u200b\u200b60 x) - pentru studiul celulelor mari de microorganisme (de exemplu, ciuperci). Aceste lentile sunt numite uscate deoarece există lentilă față și medicament sub microscopie. Datorită diferenței dintre indicii de refracție a aerului (n \u003d 1) și a sticlei (n \u003d 1,52), unele dintre razele care luminează medicamentul sunt împrăștiate și nu cad în lentilă.
Lentilele cu măriri mari (85 x 90 x) se numesc imersiune. Sunt utilizate pentru a studia forme mici de microorganisme (de exemplu, bacterii). Când lucrați cu ei, medicamentul trebuie să fie aprins cât mai mult posibil. Împrastierea luminii, care este inevitabilă atunci când lucrați cu lentile, în acest caz este eliminată prin utilizarea lichidelor de imersiune, al căror indice de refracție este aproape de indicele de refracție al sticlei. Cel mai adesea, se folosește ulei de cedru, în care n \u003d 1.515. O picătură de lichid este aplicată pe medicament și lentila este cufundată în el. Distanța focală scurtă a lentilelor cu mărire mare ((1,9 - 2,1) mm) vă permite să examinați un obiect fără a ridica lentila dintr-o picătură, ceea ce creează un mediu omogen între lentilă și preparat.
Ocularul este format din două lentile închise într-un cadru comun de metal. Lentila superioară se numește oftalmică, cea inferioară - colectivă. Ocularul mărește doar imaginea dată de obiectiv. Microscoapele sistemului Biolam sunt echipate cu oculare care oferă o mărire de 7 x, 10 x și 15 x (numerele sunt indicate pe cadru).
8) Ce înseamnă conceptul de „rezoluție” a microscopului? Care este rezoluția microscopului Biolam?
Principala caracteristică tehnică a microscopului este rezoluția - adică. distanța minimă dintre două puncte ale subiectului în cauză, la care acestea nu se îmbină într-unul, iar obiectul este clar vizibil. În practica de laborator, cele mai utilizate microscopuri de imersie biologică din seria Biolam, permițând obținerea unui obiect de mărire de până la 1800 de ori. Rezoluția finală a acestora este de 0,21 microni, prin urmare, folosind aceste microscopuri, puteți lua în considerare obiecte cu o dimensiune de cel puțin 0,21 microni.
9) Care sunt regulile microscopiei medicamentului?
Microscopia medicamentelor începe întotdeauna cu instalarea luminii. Când lucrează în timpul zilei, folosesc lumină naturală, dar mai des recurg la surse de lumină artificială care asigură iluminare reglabilă (iluminatoare OI-19, OI-35).
La instalarea luminii, condensatorul trebuie ridicat la oprire, irisul este deschis. Setările de iluminare sunt realizate cu un obiectiv cu zoom mic (8 x). Este coborât la o distanță de aproximativ 0,5 cm față de scenă, apoi, privind în ocular și rotind oglinda, acestea obțin o iluminare uniformă luminoasă a întregului câmp vizual.
Preparatul pregătit este așezat pe o masă subiect, întărită cu terminale. Microscopia începe cu o revizuire a medicamentului la mărire redusă. În același timp, observând din lateral, coborâți lentila cu un șurub macroscopic la o distanță de aproximativ 1 cm față de scenă. Privind în ocular și rotind încet șurubul macroscopic, ridică tubul până când apar contururile distincte ale preparatului. Pentru o focalizare precisă, utilizați un șurub micrometru care se rotește nu mai mult de un sfert de rotație. În această etapă, atunci când cercetează bacteriile, puteți deplasa încet medicamentul pe scenă, găsiți câmpul vizual cel mai potrivit pentru microscopie: zona medicamentului pe care microorganismele sunt în cantitate suficientă pentru a vizualiza cantitatea, sunt dispuse într-un singur strat, uniform.
Microscoapele cu mărire medie înlocuiesc lentila de mărire mică cu lentile de 40 x sau 60 x. Poziția centrată a obiectivului este evidențiată de clicul zăvorului în interiorul revolverului. Privind în ocular, ele ridică tubul și mai încet până apare imaginea și perfecționează focalizarea cu un șurub micrometru.
Microscopia la mărire ridicată (lentila 90 x) se realizează cu ulei de imersiune, a cărui picătură se aplică medicamentului. Apoi înlocuiți lentila uscată cu o lentilă de imersiune, sub controlul ochiului (vedere laterală) cufundându-l în ulei aproape până când lentila frontală intră în contact cu diapozitivul de sticlă. Privind în ocular, un tub este ridicat ușor cu un șurub macroscopic până când apare imaginea preparatului, iar apoi cu ajutorul unui șurub microscopic, acesta este focalizat.
La sfârșitul lucrului, tubul este ridicat, preparatul este îndepărtat de la stadiul obiectului, condensatorul este coborât și uleiul este îndepărtat cu grijă cu o cârpă uscată din bumbac din lentila frontală a lentilelor de imersiune. Reziduurile de ulei de imersie pot deteriora obiectivul și degradează imaginea la microscopie.
La microscopie, sunt posibile următoarele erori:
- iluminarea incompletă a câmpului vizual datorită poziției oglinzii necorespunzătoare sau poziției incorecte a lentilei (care nu este deplasată la clic pe revolverul microscopului);
- iluminarea slabă a câmpului vizual atunci când oglinda este în poziție greșită, când condensatorul este coborât sau diafragma este închisă, precum și când nu există suficient ulei de imersiune pe preparat;
- lipsa de claritate în imaginea subiectului - medicamentul nu este în centrul atenției.
Concluzie: Am făcut cunoștință cu scopul, dispozitivul, echipamentul și modul de operare al laboratorului microbiologic; a stăpânit tehnica microscopiei preparatelor microbiologice.
Ministerul Educației al Republicii Belarus
Instituție educațională
UNIVERSITATEA DE STAT MOGILEV
DEPARTAMENTUL „TEHNOLOGII ALIMENTARE”
Lucrări de laborator nr. 2
Specialitatea 1-25010901 "Cercetarea mărfurilor și examinarea produselor alimentare"
verificat
Lector superior
____________ Titenkova N.I.
„__” _________ 2011
Efectuat
Grupul de studenți TET-101
____________ Lobkova M. Yu.
„__” _________ 2011
Mogilev 2011
Ministerul Educației al Republicii Belarus
Instituție educațională
UNIVERSITATEA DE STAT MOGILEV
DEPARTAMENTUL „TEHNOLOGII ALIMENTARE”
Studiul morfologiei bacteriilor găsite în alimente
industrie. Reguli de lucru cu culturi de microorganisme
Lucrări de laborator nr. 2
Specialitatea 1-25010901 "Cercetarea mărfurilor și examinarea produselor alimentare"
verificat
Lector superior
____________ Titenkova N.I.
„__” _________ 2011
Efectuat
Grupul de studenți TET-101
____________ Șevțova E.N.
„__” _________ 2011
Mogilev 2011
MUNCA DE LABORATOR nr. 2
Studiul morfologiei bacteriilor găsite în alimenteindustrie. Reguli de lucru cu culturi de microorganisme
Scop: Cunoașterea morfologiei bacteriilor care se găsesc deseori în industria alimentară și metodele de studiere a acesteia la un microscop în preparate colorate intravitale și fixate; familiarizarea cu regulile de manipulare a culturilor de microorganisme.
Materiale și echipamente: microscop, diapozitive pentru microscop cu sau fără găuri, lamele de acoperire, lămpi de rachiu, soluții de vopsea, bucle microbiologice, ulei de imersie, culturi de bacterii pure.
PARTEA PRACTICĂ
Preparatele fixe au fost preparate, colorate folosind metoda Gram și examinate cu o lentilă de imersiune. Mărirea totală a microscopului a fost calculată: 90 x x 15 x \u003d 1350 x.
Drept urmare, am primit următoarele:
micrococci, gr (+)
stafilococi, gr (+)
bastoane, gr (+)
Întrebări de testare:
- Reguli de lucru cu culturi de microorganisme.
Atunci când pregătiți preparate de microorganisme, precum și în timpul însămânțării și recoltării lor, este necesar să respectați cu strictețe regulile și ordinea de lucru. Toate lucrările cu culturi de microorganisme trebuie efectuate în flacăra unei lămpi cu alcool. Din mediul nutritiv, microorganismele sunt prelevate de o buclă microbiologică, care este preîncărcată (flambată) în flacăra unei lămpi cu alcool.
Procedura trebuie să fie următoarea:
Aprindeți lampa de spirit.
Luați o eprubetă cu cultura și așezați-o astfel încât să fie între degetul mare și arătătorul mâinii stângi, este susținut de degetul mijlociu și este într-o poziție înclinată.
Ia bucla microbiologică cu mâna dreaptă, calcinează-o în flacăra unei lămpi cu alcool, ținând-o pe verticală.
Cu mâna dreaptă, ținând bine dopul de bumbac între degetul mic și palma, rotiți dopul, scoateți-l din tub și țineți-l cu capătul în jos, asigurându-vă că acesta nu atinge obiectele din jur.
Ardeți marginile tubului.
Introduceți bucla răcită în eprubetă și luați o cantitate mică de masă microbiană, atingând ușor cultura și fără a zgâria mediul nutritiv dens cu bucla. Dacă microorganismele sunt cultivate într-un mediu nutritiv lichid, atunci o picătură de lichid este luată în buclă.
Din nou, ardeți marginile tubului, o parte a dopului de bumbac din flacăra arzătorului și închideți tubul cu un dop.
Materialul emulsionat trebuie emulsionat într-o picătură de apă disponibilă pe o lamă de sticlă și răspândit uniform cu un strat subțire pe suprafață (se prepară un frotiu).
Ardeți bucla din nou în flacără pentru a distruge restul microorganismelor.
- Cum se prepară preparatele pentru microscopia intravitală a microbilor? Care sunt avantajele și dezavantajele acestei metode?
1 Medicamentul „picătură agățată”. O picătură mică dintr-o suspensie de celule microbiene este aplicată pe un capac de acoperire și o lamelă de sticlă este așezată cu grijă pe ea, astfel încât picatura să se încadreze liber în centrul locașului. Marginile găurilor sunt pre-lubrifiate cu vaselină, preparatul este inversat și microscopic. Această metodă este utilizată în principal pentru a studia mobilitatea microorganismelor.
2 Medicamentul „picătură zdrobită” nevopsită (nativă). O picătură de lichid se aplică pe o lamelă de sticlă (atunci când lucrați cu bacterii - apa de la robinet, când lucrați cu ciuperci microscopice - un amestec de volume egale de alcool etilic și glicerină), sunt introduse câteva microorganisme investigate, agitate și acoperite cu o înveliș, aplicându-l cu atenție de-a lungul marginii, pentru a evita formarea de bule. Evacuarea lichidului în exces este îndepărtată cu hârtie filtrantă. Bacteriile cultivate pe un mediu nutritiv solid sunt transferate într-o picătură de lichid folosind un ac bacteriologic, iar ciupercile microscopice sunt transferate cu două ace disecante. O cultură cultivată într-un mediu lichid, cum ar fi drojdia, este plasată pe o lamelă de sticlă cu o pipetă sterilă, fără a aplica mai întâi o picătură de lichid. Microscop medicamentul cu lentile uscate. Medicamentul vă permite să stabiliți forma celulelor microorganismelor în mare măsură, dimensiunea, locația, mobilitatea acestora.
3 Medicamentul „picătură zdrobită” inorganizată de microorganisme in vivo. La o picătură dintr-o suspensie microbiană pe o lamelă de sticlă se adaugă o picătură dintr-o soluție slabă (1: 1000) de colorant (albastru de metilen sau fuchsin), se amestecă, apoi se acoperă cu o copertă.
etc .................
INSTRUCȚIUNI
la atelierul de laborator pe tema "Biologie generală și microbiologie" pentru studenții direcției 240700.62 "Biotehnologie"
Moscova 2013
Introducere
Ghidurile sunt destinate studenților înscriși în direcția 240700,62 „Biotehnologie” și conțin subiectele studiilor de laborator, al căror scop este de a insufla elevilor abilitățile de a lucra în laborator cu microorganisme, de a studia morfologia și proprietățile lor fiziologice și de a stăpâni metodele de lucru microbiologic. Ca obiecte de cercetare, la efectuarea lucrărilor, se folosesc culturi pure de microorganisme - producători de substanțe biologic active.
Obiectivele orientărilor sunt:
Familiarizarea elevilor cu echipamentele laboratorului microbiologic și metodele de sterilizare a mediilor de cultură, a vaselor, a echipamentelor;
Stăpânirea studenților tehnicii de separare a culturilor pure;
Studierea de către studenți a trăsăturilor morfologice și culturale ale celor mai importante grupuri de microorganisme;
Studenții care stăpânesc metodele de contabilitate cantitativă a microorganismelor, inclusiv în produsele alimentare.
Reguli de lucru la efectuarea unui atelier de microbiologie. Siguranța în laboratorul microbiologic.
Este interzisă intrarea în laborator îmbrăcăminte exterioară și pune obiecte personale pe mese. Laboratorul microbiologic este permis să lucreze numai în halate care protejează îmbrăcămintea împotriva contaminării de către microorganisme, precum și împiedică răspândirea lor în afara laboratorului. Părul trebuie înjunghiat.
Fiecărui student i se atribuie un loc de muncă permanent, care trebuie menținut în mod constant.
Pe toate epruvetele trebuie scrise vasele Petri, flacoanele, numele microorganismului, data inoculării acestuia, numele elevului și numărul grupului.
În timpul funcționării, buclele și acele bacteriologice sunt dezinfectate prin calcinare în flacăra arzătorului înainte și după selectarea microorganismelor. La prepararea unui medicament sau la recoltarea culturilor de microorganisme cultivate pe un mediu lichid, acestea nu folosesc o buclă, ci o pipetă, o bucată de vată ar trebui introdusă în capătul său superior pentru a preveni contactul accidental al materialului microbian cu cavitatea bucală. Spatulele folosite, pipetele sunt plasate în pahare de porțelan cu soluții dezinfectante, chibrituri, hârtie filtrantă, preparatele uzate sunt plasate într-un cristalizator. Este strict interzis să puneți aceste articole pe masă.
Dacă materialul de testare sau cultura microorganismului se pun pe mâini, o masă, un halat sau pantofi, este necesar să-l informăm pe profesor despre acest lucru și să-l dezinfectăm sub îndrumarea sa.
După lecție, locul de muncă este dezinfectat, materialul folosit și alte obiecte sunt neutralizate, mâinile sunt spălate cu săpun, camera este ventilată și, dacă este posibil, sterilizată cu lămpi UV.
Dispozitivul microscopului. Preparate la microscop.
Microscop. Regulile de bază ale microscopiei.
Studiul morfologiei și structurii celulare a microorganismelor, ale căror valori sunt măsurate de micrometri, nanometri, angstromi, este posibil doar cu ajutorul microscopelor. În condiții de laborator, microscopul ușor este cel mai des utilizat.
Microscopul are părți mecanice și optice (Fig. 1). Partea mecanică include un trepied, o treaptă, un tub cu o turelă, șuruburi macro și micrometru. Partea inferioară a trepiedului este suportul microscopului, partea superioară este suportul tubului, care poate fi deplasat folosind un mecanism acționat de rotația șuruburilor de macrometru și micrometru, proiectate pentru focalizarea grosieră și respectiv a medicamentului. Când șuruburile sunt rotite în sensul acelor de ceasornic, suportul tubului microscopului este coborât, contra - se ridică. În partea superioară a suportului tubului se află un revolver care se rotește în jurul axei sale. Obiectivele sunt înșurubate în găurile din placa de jos a revolverului. Ocularele înlocuibile sunt introduse în capătul superior al tubului. O masă obiect de formă rotundă sau dreptunghiulară servește pentru a plasa medicamentul pe el, are o gaură în centru pentru trecerea razelor care luminează drogul. Masa mobilă poate fi deplasată pe orizontală cu două șuruburi situate la dreapta și la stânga. Acest lucru vă permite să plasați orice punct al medicamentului în centrul câmpului vizual. Pe suprafața mesei se află două cleme pentru fixarea medicamentului. În cazul unui stadiu nemișcat, există un cuib pentru producătorul de medicamente, în care acesta este fixat (Fig. 1).
Fig. 1. Schema microscopului Biolam: 1 - oculare; 2 - duza binoculară; 3 - dispozitiv cu turelă; 4 - lentilă; 5 - tabel subiect; 6 - condensator; 7 - carcasa obiectivului colector; 8 - un cartuș cu lampă; 9 - balamală; 10 - mâner pentru deplasarea suportului condensatorului; 11 - microsurub; 12 - macrosurub; 13 - suport pentru tub; 14 - șurub pentru fixarea duzei; 15 - indicator luminos; 16 - comutator.
Partea optică Microscopul este format dintr-un aparat de iluminat, o lentilă și un ocular. Partea de iluminare a microscopului este formată dintr-un condensator situat sub masa subiectului și un iluminator integrat cu o lampă cu incandescență de joasă tensiune. Un condensator este un sistem optic format din două lentile: plano-convex (superior) și biconvex (inferior). Condensatorul concentrează razele paralele care provin de la sursa de lumină la un moment dat, focalizarea, care ar trebui să fie în planul medicamentului. Condensatorul este deplasat în sus și în jos cu un șurub special situat sub scenă. Sub condensator există o diafragmă iris și un cadru cu balamale pentru un filtru de lumină. Diafragma irisului este utilizată pentru a reține razele suplimentare de lumină și, dacă este necesar, reduce deschiderea condensatorului (acoperirea lentilei; caracterizată prin numărul de raze care intră în obiectiv). Lentile condensatoare cu diafragmă irisă montate într-un cadru cilindric.
Obiectivul este cea mai importantă parte a microscopului. Este format dintr-un sistem de lentile închise într-un cadru metalic care conferă o imagine inversă reală mărită. Obiectivul exterior orientat către subiect este numit frontal, acesta este obiectivul principal și unic din obiectiv, ceea ce dă o creștere. Deasupra frontului sunt lentile de corecție. Au curburi diferite și sunt confecționate din sticlă cu densitate optică diferită. Lentilele de corecție sunt concepute pentru a elimina erorile și pentru a obține o imagine mai clară.
Microscoapele sunt echipate cu lentile detașabile, cu mărire proprie de 8 x, 40 x și 90 x (100 x), marcate pe un cadru metalic. Creșterea lentilei depinde de distanța focală a lentilei față și de curbura acesteia. Cu cât curbura obiectivului frontal este mai mare, cu atât distanța focală este mai scurtă și cu atât mai mare este obiectivul. Prin urmare, cu cât obiectivul este mai mare, cu atât este mai scăzut în raport cu planul medicamentului.
Ocularul servește pentru a examina imaginea unui obiect mărit folosind o lentilă și conține două lentile: un ochi (superior) și un colectiv (inferior). Microscoapele sunt furnizate cu ochelari cu o creștere de 5, 7, 10, 12, 15 și 20 de ori, ceea ce este indicat pe cadrul lor (5 x 7 x 10 x 12 x 15 x 20 x). Există microscoape mono și binoculare.
Creștere totalăcă microscopul dă este determinat de produsul de mărire a lentilei și de mărirea ocularului. Cu toate acestea, creșterea generală nu caracterizează încă toate capacitățile microscopului. O imagine mărită se poate dovedi aparentă sau confuză. Claritatea imaginii rezultate este determinată rezoluţie microscop - distanța minimă dintre două puncte atunci când nu sunt încă îmbinate într-un singur punct. Cu cât este mai mare rezoluția microscopului, cu atât obiectul poate fi mai mic.
Un obiect microscopic poate fi considerat în trei tipuri de sistem: uscat - există aer între obiectivul obiectiv și obiect; apă - între obiectivul lentilei și obiectul este o picătură de apă - imersiunea apei; ulei - obiectivul obiectivului este scufundat într-o picătură de ulei de imersie - cedru, ricin, jeleu - imersiune în ulei.
Un microscop este un dispozitiv optic care vă permite să obțineți o imagine inversă a obiectului studiat și să luați în considerare detalii mici ale structurii sale, ale căror dimensiuni sunt dincolo de rezoluția ochiului.
Rezoluţiemicroscopul oferă o imagine separată a două linii apropiate una de cealaltă. Ochiul uman liber are o rezoluție de aproximativ 1/10 mm sau 100 microni. Cel mai bun microscop ușor îmbunătățește capacitatea ochiului uman de aproximativ 500 de ori, adică rezoluția sa este de aproximativ 0,2 microni sau 200 nm.
Rezoluția și mărirea nu sunt același lucru. Dacă utilizați un microscop ușor pentru a obține fotografii cu două linii situate la o distanță mai mică de 0,2 microni, atunci, indiferent de modul în care măriți imaginea, liniile se vor contopi într-una. Puteți obține o creștere mare, dar nu puteți îmbunătăți rezoluția.
Distinge utilși creștere inutilă. Prin folosire se înțelege o astfel de creștere a obiectului observat în care pot fi dezvăluite noi detalii ale structurii sale. Inutil este o creștere în care, prin mărirea unui obiect de sute sau mai multe ori, este imposibil să descoperi noi detalii ale structurii. De exemplu, dacă imaginea obținută cu un microscop este mărită de mai multe ori proiectând-o pe ecran, atunci noi detalii mai fine ale structurii nu vor fi dezvăluite, ci doar dimensiunea structurilor existente va crește în consecință.
În laboratoarele educaționale le folosesc de obicei microscoape ușoareunde micropreparatele sunt tratate folosind lumină naturală sau artificială. Cel mai comun microscoape biologice ușoare:BIOLAM, MIKMED, ICBM (microscop microscopic de lucru), MBI (microscop microscopic) și MBS (microscop stereoscopic biologic). Ele dau o creștere a intervalului de la 56 la 1350 de ori. Microscop stereo(MBS) oferă o percepție cu adevărat tridimensională a microobiectului și crește de la 3,5 la 88 de ori.
La microscop se disting două sisteme: opticși mecanic.LA sistem opticinclude lentile, oculare și un dispozitiv de iluminat (un condensator cu diafragmă și filtru de lumină, oglindă sau o brichetă electrică).
Dispozitivul microscopelor ușoare este prezentat în Fig. 1.
Fig. 1. Dispozitivul microscopelor ușoare:
A - MIKMED-1; B - BIOLAM.
1 - ocular, 2 tuburi, suport cu 3 tuburi, 4 - șurub grosier, șurub cu 5 micrometri, 6 - suport, 7 - oglindă, 8 - condensator, iris și filtru de lumină, dispozitiv cu 9 trepte, 10 - turelă, 11 - obiectiv, 12 - carcasa obiectivului colector, 13 - cartuș cu lampă, 14 - alimentare.
Obiectiv -una dintre cele mai importante părți ale unui microscop, deoarece determină mărire utilă a obiectului.Obiectivul este format dintr-un cilindru metalic cu lentile montate în el, numărul cărora poate fi diferit. Mărirea obiectivului este indicată prin numere. În scop educațional, sunt utilizate de obicei lentile x8 și x40. Calitatea obiectivului determină rezoluția sa.
Oculararanjat mult mai simplu decât obiectivul. Este format din 2-3 lentile montate într-un cilindru metalic. Între lentile este o deschidere constantă care definește limitele câmpului vizual. Obiectivul inferior focalizează imaginea obiectului, construită de obiectiv în planul diafragmei, iar partea superioară servește direct pentru observare. Creșterea ocularelor este indicată pe ele prin numerele: x7, x10, x15. Ocularele nu dezvăluie noi detalii ale structurii și, în acest sens, creșterea lor inutil. Astfel, ocularul, ca o lupa, ofera o imagine directa, imaginara, marita a obiectului observat, construit de lentila.
Pentru determinarea mărirea totală a microscopuluiînmulțiți mărirea lentilei cu mărirea ocularului.
Dispozitiv de iluminatconstă dintr-o oglindă sau o brichetă electrică, un condensator cu diafragmă iris și un filtru de lumină situat sub subiectul subiectului. Acestea sunt concepute pentru a lumina obiectul cu un fascicul de lumină.
Oglindăservește la direcția luminii prin condensator și deschiderea scenei către obiect. Are două suprafețe: plane și concave. Laboratoarele cu lumină risipită folosesc o oglindă concavă.
Lumina electricainstalat sub condensator în soclul suportului.
Condensatorconstă din 2-3 lentile introduse într-un cilindru metalic. La ridicarea sau coborârea acestuia cu un șurub special, incidentul luminos din oglindă de pe obiect se condensează sau, respectiv, se împrăștie.
diafragma irisuluisituat între oglindă și condensator. Acesta servește la schimbarea diametrului fluxului de lumină direcționat de oglindă prin condensator către obiect, în conformitate cu diametrul lentilei frontale a lentilei și este format din plăci subțiri de metal. Folosind pârghia, acestea pot fi conectate, închizând complet lentila inferioară a condensatorului sau despărțite, crescând fluxul de lumină.
Inel de sticlă înghețatăsau filtru de luminăreduce iluminarea obiectului. Este situat sub diafragmă și se deplasează într-un plan orizontal.
Sistem mecanicmicroscopul este format dintr-un suport, o cutie cu un mecanism micrometru și un șurub micrometru, un tub, un suport pentru tub, un șurub grosier, un suport pentru un condensator, un șurub pentru deplasarea unui condensator, un revolver, o treaptă.
Stand- Aceasta este baza microscopului.
Cutie micrometru, construit pe principiul interacțiunii angrenajelor, este fixat pe stand nemișcat. Șurubul micrometrului servește la mișcarea nesemnificativă a suportului tubului și, în consecință, a obiectivului pe distanțele măsurate de micrometri. O revoluție completă a șurubului micrometrului deplasează suportul tubului cu 100 microni, iar o rotație cu o diviziune scade sau ridică suportul tubului cu 2 microni. Pentru a preveni deteriorarea mecanismului micrometrului, este permisă rotirea șurubului micrometrului într-o direcție. nu mai mult de jumătate de tură.
Tubsau un metrou- un cilindru în care sunt introduse ochii de sus. Tubul este conectat mobil la capul suportului tubului, este fixat cu un șurub de blocare într-o anumită poziție. Prin slăbirea șurubului de blocare, tubul poate fi îndepărtat.
Revolverproiectat pentru schimbarea rapidă a lentilelor care sunt înșurubate în sloturile sale. Poziția centrală a obiectivului oferă un zăvor situat în interiorul revolverului.
Șurub grosierfolosit pentru a muta în mod semnificativ suportul tubului și, în consecință, obiectivul pentru a focaliza obiectul la o mărire scăzută.
Tabelul subiectuluidestinat localizării medicamentului pe acesta. În mijlocul mesei există o gaură rotundă în care intră lentila condensatorului din față. Pe masă există două terminale cu arcuri - cleme care fixează medicamentul.
Suport condensatorfixat mobil de mecanismul micrometrului cutiei. Poate fi ridicat sau coborât cu ajutorul unui șurub care rotește roata de viteze, care este inclus în canelurile raftului cu tăierea pieptenului.
Pentru a studia drojdiile, bacteriile și mucegaiurile, microscopele sunt utilizate pentru a examina preparatele transparente în lumină transmisă (Fig. 8).
Partea optică a microscopului. Partea principală a sistemului optic al unui microscop este un obiectiv care mărește imaginea unui obiect. Este format dintr-o serie de lentile lipite împreună cu un balsam canadian și închise într-un tub metalic; există un tub pe tub cu care obiectivul este înșurubat într-o fanta specială pe revolver.
Imaginea dată de lentilă este examinată cu ajutorul unui ocular situat în partea superioară a tubului microscopului. Microscoape biologice sunt echipate cu trei oculare interschimbabile. Pe marginea superioară a obiectivului ocular, este indicată creșterea acesteia. De obicei, ocularele dau o creștere de 7, 10 și 15 ori. Mărirea totală a obiectului cu un microscop este egală cu produsul măririi ocularului și mărirea obiectivului \u003d 900 de ori.
Dispozitivul de iluminare este amplasat sub stadiul microscopului și este format dintr-un condensator cu diafragmă iris și o oglindă.
Partea mecanică a microscopului. Această parte constă dintr-un trepied, suport de tub cu un revolver, șuruburi pentru deplasarea tubului (macrometru și micrometru), un aparat de iluminat și un stadiu de microscop. Principalele părți ale trepiedului sunt suportul inferior (piciorul), care conferă stabilitate microscopului și suportul tubului la microscop.
Tehnica microscopiei. Înainte de a începe microscopia, trebuie să setați iluminarea potrivită. Pentru a face acest lucru, scoateți ocularul de la microscop și, privind direct în lentilă, instalați o oglindă, astfel încât sursa de lumină (lampă sau fereastră) să fie vizibilă în mijlocul obiectivului. După instalarea prealabilă a luminii, preparatul final este plasat pe stadiul microscopului și fixat cu cleme. Folosind un șurub macroscopic, coborâți tubul aproape în contact cu capacul. Apoi, privind în ocular, ele ridică treptat tubul până când apare o imagine. Utilizați un șurub micrometru pentru ascuțire.
Examenul microscopic trebuie să mențină ambii ochi deschiși. Uită-te la microscop cu ochiul stâng.
Tehnica de pregătire a microscopului. O picătură din lichidul de testare este aplicată pe o lamelă de sticlă curată și acoperită cu grijă cu o copertă. Dacă preparatul este preparat dintr-un mediu nutritiv dens, atunci pe o lamelă de sticlă se aplică o picătură de apă pură de la robinet, cultura de testare este plasată în ea și preparatul este acoperit cu o copertă. Nu trebuie să existe bule de aer sub acestea din urmă, deoarece acestea interferează cu microscopia. Excesul de lichid care iese din copertina este curățat cu hârtie de filtru tăiată în mici benzi înguste în avans. Produsul finit este plasat pe un subiect și examinat.