Određivanje vrste mesa metodom precipitacije. Određivanje vrste krvi. Laboratorijske metode za određivanje vrste mesa

Pokušaj da se meso jedne vrste životinja zamijeni za meso druge vrste životinja, u pravilu je vrijedniji naziva se krivotvorenje vrste i može se dogoditi na tržnicama u trgovačka mreža i institucije Ugostiteljstvo... Stoga veterinar mora znati odrediti vrstu mesa. Obično se za krivotvorenje vrsta koriste životinjski leševi sličnih veličina, oblika i drugih karakteristika. Tako konjsko meso obično pokušavaju proći kao govedinu i obrnuto (u nekim zemljama gdje se konjsko meso više cijeni), trupovi velikih pasa se provlače kao janjetina, mačke pokušavaju proći kao zečevi i nutrije. Za određivanje vrste mesa koriste se objektivne i subjektivne metode.

Subjektivne metode za određivanje vrste mesa. Subjektivne metode uključuju konfiguraciju, morfološke i organoleptičke karakteristike mesa i sl. Tako npr. pri vizualnom pregledu konjski trup ima duži vrat, dobro mišićave sapi, dok je u trupova krava vrat kraći, sapi je ravnija, perle su često ispupčene i išijatični tuberkuli; konjsko meso je tamnije boje, iako stara ili slabo iskrvarena govedina može imati tamnocrvenu boju, konjsko meso vizualno ima veća i jasnije definirana mišićna vlakna u odnosu na govedinu.

stol 1

Specifičnosti strukture kostiju kostura krave i konja


	Nema stražnjih branika, postoje stražnji	Postoje prednji i stražnji rupe za krila
Epistrofija	Zubni proces je šuplji, lunarnog oblika	Zubica je konveksna, dlijetasta
	Ravan bez grebena, sa svake strane ima 6 glenoidnih jama	Komprimirano sa strane ima dobro izražena grebena i 8 glenoidnih jama
	Sakrum je ravan, sastoji se od 5 sraslih kralježaka, trnasti nastavci nalaze se odvojeno jedan od drugog	Sakrum je konveksan, potpuno spojen, sastoji se od 5 potpuno sraslih kralježaka, trnasti nastavci se spajaju u čvrst greben
	Široki, ravni, 13 pari	Uski, bačvasti dio, 18 pari
	Vrat je kratak, visoka osjeta visi preko vrata, završava akromionom, omjer prednjeg i stražnjeg dijela je 1:4	Vrat je dugačak, kralježnica niska, spušta se do vrata lopatice, nema akromiona, omjer prednjeg i stražnjeg dijela je 1:3
humeralni	Ima dva bloka slijepog crijeva i hrapavosti umjesto okretnice	Ima tri, kockasta nastavka i visoko razvijen trohanter
Radijalni i ulnarni	Radijus i ulna su iste duljine	Radijus doseže sredinu lakatne kosti
femoralni	Procesi i izbočine su zaglađene, veći trohanter je monolitan, mali je u obliku tupog tuberkula, treći trohanter je odsutan	Velika pljuvačka podijeljena je na dva dijela, jasno definirana mali i treći ražanj
Tibija	Tibija je zakrivljena medijalno, tibija je u obliku rudimentarnog nastavka	Tibija ima trokutasti presjek, fibula ga prati do sredine
Torakalni i lumbalni kralješci	Spinozni procesi kralježaka su ravni, smješteni okomito, njihov gornji dio usmjeren je prema naprijed	Spinozni nastavci završavaju zadebljanjem u obliku stošca i međusobno se dodiruju

Objektivne metode za određivanje vrste mesa metode za određivanje vrste mesa

Najvažnije su objektivne metode koje treba koristiti pri sastavljanju službena mišljenja... Te metode uključuju: anatomske značajke strukture kostiju kostura, talište masti, sadržaj glikogena u mesu i reakciju taloženja sa specifičnim serumima koji se talože.

Određivanje vrste prema anatomskim značajkama strukture kostiju skeleta i unutarnji organi

Po bilo kojoj kosti kostura, pa čak i po njezinu fragmentu, može se odrediti vrsta mesa. Glavni karakteristične značajke slične kosti kostura u uspoređenih životinja prikazane su u tablici. 12.

Stol. 2

Specifičnosti strukture kostiju kostura mačke, zeca i nutrije


	Omjer	Omjer duljine	Oblik dijamanta
dužina i širina	i širina oštrice	mi, omjer
lopatica 1:3, vrat-	1:2, vrat je kratak,	dužina i širina
ka dugo, os	awn visoko, navi-	lopatica 1: 1, kralježnica
nisko,	siše preko vrata,	nisko, akromion
račva u	ogranak ogranka	dugi počeci-
dva dijela	je usmjerena i usmjerena	Xia iz srednje trećine

Femoralna	ima veliku,	Ima jednu bol	Ima velike i
	mali i treći ražanj	shoy pljuvati	nedostaje treći mali pljuvač
Kosti potkoljenice	Rudimen fibule-	Tibija i fibula	Tibijalne i peronealne pletenice
vezan i raste zajedno s bolom	spojena pokretno zglobnom	povezani su pokretnim zglobnim
smicanje koje završava u svojoj gornjoj trećini	površine, tibija je mnogo deblja od fibule	površine, tibija i fibula su gotovo iste debljine.
	Dugačak, sastoji se od četiri kralješka s visokim, odvojenim trnastim	Kratko s tri niski čunjevi različite procese na krajevima	Sastoji se od četiri masivna kralješka s odvojenim spinoznim nastavcima
izdanci

Pri određivanju sitnog mesa goveda a psi bi trebali uzeti u obzir činjenicu da su kosti malih preživača po obliku slične onima u krave.

Po anatomskim značajkama građe unutarnjih organa moguće je također nepogrešivo utvrditi vrstu pripadnosti mesa i proizvoda klanja.

Jetra krave je masivna, konveksno-konkavna, tamnosmeđe boje, lobulacija je slabo izražena, s desne strane s trbušne strane nalazi se interlobularni usjek u kojem se nalazi žučni mjehur. Kod konja je velika jetra jasno podijeljena na tri režnja, desni je režanj odvojen od srednjeg dubokim zarezom, a lijevi od srednjeg, okruglim ligamentom, nema žučnog mjehura. Jetra psa veća je od jetre malih preživača, podijeljena na sedam režnjeva. Pluća krave imaju jasan mrežasti uzorak, jasno su podijeljena na kranijalni, medijalni i kaudalni režanj; prednji režanj lubanje je podijeljen na dvije polovice, a u desnom plućnom krilu nalazi se pomoćni režanj. Kod konja je lobularnost pluća slabo izražena, oštar rub svakog pluća ima blagi međulobarni razmak koji odvaja kaudalni režanj od lobanje. Kod pasa, za razliku od ovaca i koza, retikularni uzorak na plućima je nevidljiv, a režnjevi pluća su odvojeni dubokim međulobarnim prazninama koje se protežu do bronha.

Kravlji bubreg se sastoji od 16-18 režnjeva. U konja su bubrezi jednopapilarni, lijevi su duguljasti ili grahastog oblika, a desni srčani.

Slezena krave je ravna, izdužena sa zaobljenim rubovima. Slezena konja je ravna, srpasta. Prednji rub je konkavan i šiljast, stražnji rub je konveksan i tup. U psa je slezena ravna, nepravilna, trokutasta, donji joj je kraj proširen, a gornji sužen.

Srce krave ima oštriji vrh od konja, osim toga, stijenka lijeve klijetke kod konja je 2,5 puta deblja od one desne. Srce ovaca i koza ima šiljasti vrh, a kod pasa je srce zaobljeno.

Jezik krave ima debeo šiljasti kraj, u srednjoj trećini nalazi se grebenasto zadebljanje, ovalni epiglotis. Jezik konja je duži i ravniji, kraj mu je zaobljen, epiglotis zaobljen. Kod pasa, za razliku od malih preživača, jezik je širok, ravan sa šiljastim rubovima, na njegovoj gornjoj površini nalazi se srednji utor.

Određivanje tačke taljenja masti Točka topljenja masti strogo je individualna za životinje različiti tipovi te je stoga objektivan pokazatelj određivanja vrste mesa. Štoviše, ovaj pokazatelj u uspoređenim životinjskim vrstama razlikuje se 1,5-2 puta, što uvelike olakšava dijagnozu.

Formulacija reakcije Testna mast se zagrijava i skuplja u prozirne staklene kapilare promjera 1,5 mm. Visina stupca masti treba biti 5-7 mm. Kapilare s masnoćom stavljamo u hladnjak na 1-2 sata. Nakon hlađenja, kapilara s mašću se učvršćuje na termometar pomoću elastične trake tako da stupac masti bude u ravnini s glavom termometra. Nakon toga se termometar zajedno s kapilarom pričvrsti na tronožac i spusti u prozirnu čašu napunjenu vodom i stavi na električnu ploču za kuhanje tako da gornji dio kapilare bude iznad površine vode (vidi sl. I). . Zatim počnu zagrijavati vodu miješajući je staklenom šipkom. Zagrijavanje se nastavlja sve dok stupac masti ne postane proziran i pod pritiskom vode se ne počne dizati prema kapilari. U ovom trenutku se očitava termometar. Mjerenje se ponavlja pet puta i pronalazi se aritmetička sredina. Dobiveni rezultat smatra se točkom taljenja testne masti. Točka taljenja masti nekih sisavaca i ptica data je u tablici. 3.

Određivanje sadržaja mišićnog glikogena

U mesu uspoređenih životinja sadržaj glikogena se razlikuje 2-3 puta. Tako je, na primjer, sadržaj glikogena u mesu konja, pasa i mačaka znatno veći nego u mesu krava, sitnih preživača i kunića, što omogućuje korištenje kvalitativne reakcije na glikogen za određivanje vrste mesa. . Međutim, treba imati na umu da sadržaj glikogena nije konstantan i ovisi o stanju životinje u vrijeme klanja, uvjetima sazrijevanja i trajanju skladištenja mesa.

Postavka reakcije

Uzmite uzorak testnog mesa, sameljite ga do stanja mljevenog mesa, napunite destiliranom vodom u omjeru 1:4 i kuhajte u tikvici 30 minuta. Juha se filtrira kroz filter papir i ohladi. U epruvetu se uzme 5 ml juhe i doda 5-10 kapi Lugolove otopine.

Obračunavanje reakcije

Ako je reakcija pozitivna (tipično za konje, pse i mačke), sadržaj epruvete je obojen trešnje crvenom ili lila.

U slučaju upitne reakcije (to se događa kod mačaka), boja će biti narančasta

Ako je reakcija negativna (tipično za krave, ovce i koze), sadržaj epruvete će biti žut.

Reakcija precipitacije sa serumima specifičnim za vrstu

Reakcija s taložnim serumima specifičnim za vrstu jedna je od najtočnijih metoda za identifikaciju vrste mesa. Uz pomoć ove reakcije moguće je ispitati ne samo meso, već i mljeveno meso, pa čak i poluproizvode te odrediti dodavanje mesa druge vrste životinja tim proizvodima.

Formulacija reakcije 43 od ispitivanog mesa, mljevenog mesa, poluproizvoda priprema ekstrakt. Za to se uzorak proizvoda drobi do stanja mljevenog mesa i prelije s 0,9% otopinom natrijevog klorida u omjeru 1:1 i ekstrahira 3 sata, nakon čega se filtrira kroz papirni filter (ekstrakt mora biti transparentan).

Talište masti životinja različitih vrsta

Optimalni omjer proteina i ekstrakta za reakciju je 1:1000.

Za postavljanje reakcije tri reda Ulengut epruveta ugrađuju se u stativ. U epruvete prvog reda uz pomoć pipete uzeti 0,9 ml ispitivanog ekstrakta, u epruvete drugog reda 0,9 ml 0,9% otopine natrijevog klorida, a u epruvete trećeg reda 0,9 ml standardni serumi različiti tipoviživotinje koje imaju isto razrjeđenje kao dijagnostički precipitirajući serumi. Zatim se u svaku od tri epruvete pomoću Pasteurove pipete doda 0,1 ml dijagnostičkog seruma koji precipitira s proteinom određene životinjske vrste.

Obračunavanje reakcije

Reakcija se uzima u obzir nakon 10 minuta. Reakcija se smatra pouzdanom ako sadržaj epruvete sa fiziološkom otopinom ostane bistar, a u epruveti sa standardnim serumom nastane precipitacijski prsten.

Ako se u epruveti s ekstraktom testa stvori isti prsten, tada se reakcija smatra pozitivnom i utvrđuje se vrsta mesa. Ako sadržaj ove epruvete ostane proziran, tada se reakcija smatra negativnom i studije se nastavljaju sa serumima drugih životinjskih vrsta.

/ Tishinova L.A. // Mater. II Sveruski. Kongres sudskih liječnika: sažeci. - Irkutsk-M., 1987. - S. 264-266.

Utvrđivanje vrstne pripadnosti objekata biološkog podrijetla

bibliografski opis:
Određivanje pripadnosti vrstama objekata biološkog podrijetla / Tishinova L.A. // Mater. II Sveruski. Kongres sudskih liječnika: sažeci. - Irkutsk-M., 1987.-- S. 264-266.

html kod:
/ Tishinova L.A. // Mater. II Sveruski. Kongres sudskih liječnika: sažeci. - Irkutsk-M., 1987.-- S. 264-266.

kod za ugradnju na forum:
Određivanje pripadnosti vrstama objekata biološkog podrijetla / Tishinova L.A. // Mater. II Sveruski. Kongres sudskih liječnika: sažeci. - Irkutsk-M., 1987.-- S. 264-266.

wiki:
/ Tishinova L.A. // Mater. II Sveruski. Kongres sudskih liječnika: sažeci. - Irkutsk-M., 1987.-- S. 264-266.

Kako bi se utvrdila vrstna pripadnost tragova krvi i izlučevina u forenzičkoj praksi koriste se imunološki testovi, reakcija taloženja u različitim modifikacijama i reakcija imunofluorescencije. Uz pomoć reakcije imunofluorescencije utvrđuje se i vršno podrijetlo pojedinih stanica. Međutim, postoje situacije u kojima su ti testovi neučinkoviti. To se opaža u slučajevima kada su predmeti ispitivanja bili izloženi nepovoljnim čimbenicima, u vezi s kojima je došlo do uništenja proteina specifičnog za vrstu ili promjena koje ometaju njegovu identifikaciju.

U svezi s navedenim, potrebno je razviti dodatne metode za utvrđivanje pripadnosti vrstama objekata biološkog podrijetla.

U ovom aspektu posebno je zanimljiv antigen H, koji se, sudeći prema literaturnim podacima (M. Creere, 1956; W. Reimann, S. Popvassileff, 1960; AK Tumanov, 1975), nalazi u ljudskoj krvi, bez obzira na skupinu pripadnost prema ABO sustavu, kao i kategoriju izlučivanja i nema kod životinja. Poznato je da ovaj antigen, koji je polisaharid, ima veću otpornost u usporedbi s proteinskim antigenima (GA Sergeeva, Yu.D. Alekseev, 1981; EI Koroleva, 1983).

Svrha našeg istraživanja je utvrditi vrijednost H antigena ABO sustava kao specifičnog testa za utvrđivanje pripadnosti osobe biološkim objektima otkrivenim na materijalnim dokazima.

U pokusu je H antigen određen u tekućoj, osušenoj krvi i slini, bukalnim epitelnim stanicama 132 darivatelja i darivatelja u dobi od 26 do 56 godina svih skupina prema ABO sustavu, od kojih je 16 neoslobađajuće skupine. Proučavane su i tekuća i suha krv 32 krave, 26 ovnova, 24 svinje, 26 pasa, 7 mačaka, 6 konja i bukalne epitelne stanice 8 pasa i 4 mačke. Za tekuću krv korištena je reakcija aglutinacije na ravnini iu epruvetama korištenjem heteroimunog anti-H seruma. kao i lektini (ekstrakti iz plodova bazge, metlice i sjemenki graha Vaterer), za suhu krv - reakcija apsorpcije aglutinina u kvantitativnoj modifikaciji i apsorpcija-elucija s istim reagensima, slina - reakcija apsorpcije aglutinina u kvantitativnoj modifikaciji fluorescencije, stanice - reakcija imuniteta ...

Kod svih 132 darivatelja određen je antigen H bez obzira na pripadnost skupini; jednako je jasno detektiran svim reakcijama i kod izlučivača i kod ne-izlučivača, ali je u potonjima, pri korištenju RIF-a, zabilježeno smanjenje broja svjetlećih stanica i svjetline sjaja.

Ni u jednoj od ispitivanih životinja (u reakcijama su korišteni gore navedeni lektini, luminiscentni anti-ram i heteroimuni anti-H serum) nije ustanovljen antigen H.

Navedena literatura i vlastiti podaci o specifičnosti vrste antigena H omogućili su nam da primijenimo ovaj test za određivanje vrste objekata biološkog podrijetla u 7 opažanja iz prakse. U jednom od njih pregledan je periost, u četiri - izolirane epitelne stanice kože (predmeti su skinuti s odjeće, kopče remena, traktora, u izbijanju požara), u dvije - tragovi krvi na koži i ključ. Reakcijom precipitacije nije bilo moguće utvrditi pripadnost ovih objekata vrsti, međutim, antigen H detektiran je reakcijama imunofluorescencije i mješovite aglutinacije.

Dakle, naša eksperimentalna i praktična zapažanja upućuju na to da se H antigen ne detektira u životinja, ali se jednako jasno detektira u krvi i stanicama tkiva svih ljudi, bez obzira na pripadnost skupini prema ABO sustavu i kategoriji izlučivanja. Posljedično, prisutnost ovog antigena je dodatni test specifičan za vrstu koji omogućuje procjenu pripada li objekt osobi. Prema H antigenu mogu se ustanoviti vrste izlučevina, kao i krv, tjelesna tkiva i izolirane stanice.

Definicija vrsta pripadnost krvi - rješenje pitanja njezine pripadnosti (životinji ili osobi). Određivanje vrste krvi je preduvjet za naknadno istraživanje radi utvrđivanja krvnih grupa i mogućnosti njegovog podrijetla od određene osobe. Takva studija također vam omogućuje da provjerite verziju osumnjičenika o podrijetlu krvi na odjeći i instrumentima zločina od određene životinje. Utvrđivanje činjenice podrijetla krvi od određene životinje ili ptice može biti i samostalna studija krivolova, zrakoplovnih nesreća i drugih okolnosti.

Riža. 93. Reakcija Chistovich.
Lijevo - pozitivno; desno je negativan.

Vrsta krvi utvrđuje se reakcijom precipitacije. Ova reakcija uključuje napa od mrlja (krvni proteini – antigeni) i taloženja serum(antitijela), sposobna reagirati samo s proteinom osobe ili određene životinje – konja, psa, svinje, goveda itd. Specifična interakcija antigena vrste i antitijela očituje se taloženjem precipitata. Vještak utvrđuje s kojim od seruma uvedenih u reakciju nastaje talog i na temelju toga utvrđuje vrstu pripadnosti krvi u mrlji. Za kontrolu se također provode pokusi s ekstraktima iz predmeta izvan mrlja krvi (slika 93).
Reakcija precipitacije je vrlo osjetljiva. Njegov rezultat uvelike ovisi o stanju proteina u krvi, uglavnom o njihovoj topljivosti. Stoga, nepravilno rukovanje materijalnim dokazima, posebice sušenje na visokoj temperaturi, može dovesti do prijelaza bjelančevina krvi u netopivo stanje, što onemogućuje utvrđivanje njihove vrste. Prijenos mokre odjeće s tragovima krvi dovodi do njezina truljenja i denaturacije proteina, što također ne dopušta određivanje vrste krvi.

Riža. 94. Reakcija precipitacije u agaru (objašnjenje u tekstu).

Reakcija taloženje se obično vrši u cijevima s tankim krajem. U njih se najprije stavi ekstrakt s ispitivanog mjesta, a zatim se pipetom spusti serum za taloženje na dno epruveta. Uz pozitivnu reakciju, na granici između seruma i ekstrakta stvara se talog u obliku diska. Odsutnost sedimenta u kontrolnoj epruveti s ekstraktom nosivog predmeta omogućuje u takvim slučajevima da se donese zaključak o određenoj vrsti krvi na istraženom mjestu. Negativan rezultat precipitacijske reakcije pri korištenju svih precipitirajućih seruma može biti povezan s uništenjem ili netopljivošću krvnih bjelančevina, nedovoljnom količinom ili prisutnošću krvi bilo koje druge životinje. U takvim slučajevima pribjegavaju koncentriranju ekstrakata i primjeni osjetljivijih metoda za uspostavljanje vrsta krvni pribor - reakcije taloženja na posebnom papiru za kromatografiju, reakcije taloženja u agaru, metode elektroprecipitacije itd. Reakcija precipitacije u agaru koristi se i u slučajevima kada zamućenost ekstrakta onemogućuje proučavanje u tekućem mediju. Na staklo se izlije sloj rastaljenog agara, nakon što se skrući, u njemu se prave udubljenja, u neke se stavlja ekstrakt iz mrlje, a u druge - taložni serum. Difundiraju u agar i kada se susreću ekstrakt (antigeni) i precipitirajući serum, ako su homologni, nastaje talog u obliku bjelkaste trake. Ako napa i serum heterologan, ne stvara se talog (slika 94).
Za razlikovanje ljudske i životinjske krvi (po sadržaju niza anorganskih elemenata) može se koristiti i metoda emisijske spektralne analize. Trenutno se, kako bi se povećala osjetljivost i razlučivost reakcije taloženja, koristi laserski indikator kao registrator stvaranja taloga. Metoda omogućuje određivanje vrste krvi u mješovitim i teško otapavim mrljama, u tragovima krvi na kontaminiranim nosećim predmetima.
Trenutno se za određivanje vrste krvi preporučuje i metoda imunofluorescencije, u kojoj se aglutinirajući serum kombinira s fluorokromom. U slučaju pozitivnog rezultata, pri pregledu predmeta u ultraljubičastim zrakama vidljiv je sjaj bojom koja odgovara fluorokromu s kojim je serum prethodno spojen.

Određivanje vrste krvi - rješavanje pitanja njezine pripadnosti (životinji ili osobi). Određivanje vrste krvi preduvjet je za naknadna istraživanja radi utvrđivanja krvnih grupa i mogućnosti njezina podrijetla od određene osobe. Takva studija također vam omogućuje da provjerite verziju osumnjičenika o podrijetlu krvi na odjeći i instrumentima zločina od određene životinje. Utvrđivanje činjenice podrijetla krvi od određene životinje ili ptice može biti i samostalna studija krivolova, zrakoplovnih nesreća i drugih okolnosti.

Riža. 93. Reakcija Chistovicha.
Lijevo - pozitivno; desno je negativan.

Vrsta krvi utvrđuje se reakcijom precipitacije. Ova reakcija uključuje ekstrakt iz mrlje (proteini krvi - antigeni) i taloženje seruma (antitijela), koji mogu reagirati samo s proteinom osobe ili određene životinje - konja, psa, svinje, goveda, itd. Specifična interakcija vrsta antigena i antitijela očituje se precipitacijom (precipitatom). Vještak utvrđuje s kojim od seruma uvedenih u reakciju nastaje talog i na temelju toga utvrđuje vrstu pripadnosti krvi u mrlji. Za kontrolu se također provode pokusi s ekstraktima iz predmeta izvan mrlja krvi (slika 93).

Reakcija precipitacije je vrlo osjetljiva. Njegov rezultat uvelike ovisi o stanju proteina u krvi, uglavnom o njihovoj topljivosti. Stoga, nepravilno rukovanje materijalnim dokazima, posebice sušenje na visokoj temperaturi, može dovesti do prijelaza bjelančevina krvi u netopivo stanje, što onemogućuje utvrđivanje njihove vrste. Prijenos mokre odjeće s tragovima krvi dovodi do njezina truljenja i denaturacije proteina, što također ne dopušta određivanje vrste krvi.

Reakcija taloženja obično se provodi u cijevima s tankim krajem. U njih se najprije stavi ekstrakt s ispitivanog mjesta, a zatim se pipetom spusti serum za taloženje na dno epruveta. Uz pozitivnu reakciju, na granici između seruma i ekstrakta stvara se talog u obliku diska. Odsutnost sedimenta u kontrolnoj epruveti s ekstraktom nosivog predmeta omogućuje u takvim slučajevima da se donese zaključak o određenoj vrsti krvi na istraženom mjestu. Negativan rezultat precipitacijske reakcije pri korištenju svih precipitirajućih seruma može biti povezan s uništenjem ili netopljivošću krvnih bjelančevina, nedovoljnom količinom ili prisutnošću krvi bilo koje druge životinje. U takvim slučajevima pribjegavaju koncentriranju ekstrakata i primjeni osjetljivijih metoda za određivanje vrste krvi - precipitacijske reakcije na posebnom papiru za, taloženje u agaru, metode elektroprecipitacije itd. Reakcija precipitacije u agaru također se koristi u slučajevima kada zamućenost ekstrakta sprječava tekući medij. Na staklo se izlije sloj rastaljenog agara, nakon što se skrući, u njemu se prave udubljenja, u neke se stavlja ekstrakt iz mrlje, a u druge - taložni serum. Difundiraju u agar i kada se susreću ekstrakt (antigeni) i precipitirajući serum, ako su homologni, nastaje talog u obliku bjelkaste trake. Ako su ekstrakt i serum heterologni, ne stvara se talog (slika 94).

Riža. 94. Reakcija precipitacije u agaru (objašnjenje u tekstu).

Za razlikovanje ljudske i životinjske krvi (po sadržaju niza anorganskih elemenata) može se koristiti i metoda emisijske spektralne analize. Trenutno se, kako bi se povećala osjetljivost i razlučivost reakcije taloženja, koristi laserski indikator kao registrator stvaranja taloga. Metoda omogućuje određivanje vrste krvi u mješovitim i teško otapavim mrljama, u tragovima krvi na kontaminiranim nosećim predmetima.

Trenutno se za određivanje vrste krvi preporučuje i metoda imunofluorescencije, u kojoj se aglutinirajući serum kombinira s fluorokromom. U slučaju pozitivnog rezultata, pri pregledu predmeta u ultraljubičastim zrakama vidljiv je sjaj bojom koja odgovara fluorokromu s kojim je serum prethodno spojen.

Vrsta pripadnosti mesa domaćih, divljih životinja i peradi utvrđuje se radi rješavanja pitanja vezanih za forenzičku

Veterinarsko vještačenje u slučajevima zamjene mesa jedne za druge (falsifikovanje), krivolova, krađe.

Postoje indikativne i pouzdane (točne) metode] za određivanje vrste mesa.

Približne točke su: talište i skrućivanje masti ispitivanog mesa, jodni broj, gustoća, indeks loma; prisutnost (kvalitativne reakcije) i koncentracija glikogena u mišićnom tkivu, organoleptički pokazatelji masti i mesa .:

Pouzdanim (točnim) metodama za određivanje vrste mesa smatraju se postavka precipitacijske reakcije (zbog prisutnosti hiperimunih seruma) i anatomske značajke! struktura kostiju kostura (ako ih ima).

Neki fizikalno-kemijski pokazatelji raznih vrsta jestivih topljenih masti dati su u tablici. 13.

Određivanje tačke taljenja masti. U čistu, suhu staklenu kapilaru promjera 1,4-1,5 mm skuplja se otopljena i filtrirana mast ispitnog uzorka. Duljina stupca masti u kapilari treba biti oko 20 mm. Kapilara za potpuno skrućivanje masti u njoj se drži 1-2 sata u kućnom hladnjaku ili na ledu. Nakon hlađenja, kraj kapilarne cijevi napunjen mašću se odsiječe (odlomi), ostavljajući stupac masti dugačak najmanje 5 mm. Kapilara je gumenim prstenom pričvršćena na kemijski termometar na način da je njezin kraj, ispunjen masnoćom, okrenut prema gore, a onaj bez masti prema dolje. Termometar s kapilarom stavlja se u epruvetu (promjera 20-25 mm) i učvršćuje u nju pomoću čepa s rupom za termometar. Termometar ne smije dodirivati stijenke cijevi. Epruveta je pričvršćena u tronožac, spuštena u čašu s vodom, pri čemu razina vode u čaši treba biti viša od gornjeg kraja kapilare. Voda u čaši se polako zagrijava i na tamnoj pozadini kroz povećalo promatrajte očitanje termometra i stanje masti u kapilari. Očitavanje termometra u trenutku kada mast počinje teći kroz kapilaru i kada se u njenom gornjem dijelu stvara slobodan prostor, bilježi se kao točka taljenja masti. Određivanje se provodi dva puta i rezultatom se smatra aritmetička sredina dvaju testova; ne smiju se razlikovati za više od 0,5 °C.

Određivanje točke stinjavanja masti. Točka tečenja je najviša temperatura koja kratko vrijeme ostaje konstantna tijekom prijelaza masti iz tekućeg u kruto stanje. Točka tečenja ovisi o kemijski sastav masti i koristi se ne samo za procjenu stupnja čistoće masti, već i za grubo određivanje vrste. Testna mast se otopi u vodenoj kupelji, filtrira, osuši i ulije u epruvetu. Temperatura masti trebala bi biti 12-15 °C viša od očekivane točke stinjavanja. Cijev se zatvara čepom, u koji se umetne termometar s ljestvicom podijeljenom na petine ili desetine stupnja. Termometar je ojačan tako da mu se živina kuglica nalazi u sredini sloja masti i ne dolazi u dodir sa stijenkama i dnom epruvete.

Cijev je ojačana u grlu staklene posude tako da ne dodiruje dno; staklenka se uroni u posudu s vodom i ledom.

Otopljena mast se miješa termometrom dok se ravnomjerno ne ohladi. Nakon gubitka prozirnosti masti, termometar se ostavlja u mirovanju i svake 2 minute bilježi pad temperature.

Od trenutka kada se masnoća kristalizira, pad temperature se usporava, zatim može ostati na istoj razini ili lagano porasti i ponovno pasti. Budući da masti nisu čiste tvari, njihova točka tečenja je nestabilna.

Maksimalno očitanje termometra uočeno tijekom kristalizacije masti uzima se kao njegova točka tečenja.

Određivanje indeksa loma (refrakcije) masti. Masnoća koja se ispituje mora biti u tekućem stanju, pa se guste životinjske masti tope. Određivanje se provodi pomoću različitih refraktometara. Refrakciona svojstva (refrakcija) masti ovise o količini triglicerida, zasićenih i nezasićenih masnih kiselina sadržanih u njoj.

Prvo se refraktometar namjesti na destiliranu vodu (n = 1,333). Indeks loma masti nalazi se na temperaturi blizu njezine točke taljenja. Ako je temperatura taljenja viša od 20 ° C, tada se indeks loma ponovno izračunava prema formuli n 20 ° C = n + (TC - 20 ° C) 0,00035, gdje je n 20 ° C indeks loma na 20 ° C ; n je indeks loma na ispitivanoj temperaturi; (TC - 20 ° C) - temperaturna razlika; 0,00035 je konstantna vrijednost.

Kap testne masti nanosi se na donju prizmu refraktometra. Iluminator usmjerava snop svjetlosti u osvjetljujuću prizmu. Promatranje se provodi kroz okular.

Postavljena je podjela ljestvice kroz koju prolazi granica svjetla i sjene - to će biti indeks loma proučavane masti.

Određivanje jodnog broja masti. Vrijednost ovog pokazatelja ocjenjuje se prema prevlasti zasićenih ili nezasićenih masnih kiselina u masti. Što je više nezasićenih masnih kiselina u masti, to je veći njezin jodni broj.

Vatrostalne masti imaju nizak jodni broj, masti s niskim taljenjem - visok, stoga se po vrijednosti jodnog broja može grubo odrediti njezina vrsta.

Reakcija na glikogen. U zrelom mesu raznih životinja glikogen se nalazi u sljedećim količinama: govedina - 0,2-0,3% (otprilike ista količina u janjetini i svinjetini), konjsko meso - oko 1,0; pseće meso - oko 2,0; mačje meso - oko 0,5%. Stoga se kvalitativna reakcija na glikogen koristi za razlikovanje janjetine od psećeg mesa, konjskog mesa od govedine.

Određivanje: uzorak mesa (15 g) zdrobi se škarama, prenese u tikvicu i doda 60 ml destilirane vode. Uzorak mesa može biti veći ili manji, ali omjer mesa i vode

Trebalo bi biti 1:4. Sadržaj tikvice se dovede do vrenja i kuha se 30 minuta. Juha se filtrira kroz filter papir i ohladi.

U epruvetu se ulije 5 ml filtrata i doda se 5-10 kapi lugolove otopine. Uz pozitivnu reakciju, juha postaje trešnje crvena, s negativnom reakcijom - žuta, s sumnjom - narančasta.

Meso psa, konja, deve, medvjeda, mačke u većini slučajeva daje pozitivnu reakciju na glikogen (ekstrakt iz mačjeg mesa može dati sumnjivu reakciju).

Meso ovaca, koza, goveda, kunića i svinja za glikogen daje negativnu reakciju.

Treba imati na umu da meso mladih životinja svih vrsta daje pozitivnu reakciju na glikogen, dok meso starih i bolesnih životinja, kao i uzeto s glave i vrata, obično daje negativnu reakciju na glikogen.

Reakcija precipitacije. Temelji se na taloženju proteinskog precipitata pod utjecajem precipitiranog seruma na odgovarajući antigen. Ovo je najtočnija metoda za određivanje vrste mesa. Ovom metodom se može odrediti vrsta mesa, čak i ako je soljeno ili kuhano.

Za postavljanje reakcije potrebno je imati set odgovarajućih precipitirajućih seruma, kao i normalan krvni serum životinja različitih vrsta. Proizvode se u Istraživačkom institutu za cjepiva i serume u Sankt Peterburgu i šalju se potrošačima na zahtjev pouzećem. Tsri dugotrajno skladištenje kloroform se doda ispod seruma i prelije u tikvice sa mljevenim čepovima. Prethodno postavite titar precipitirajućih seruma i odredite njihovu specifičnost.

Titar precipitiranog seruma provjerava se na sljedeći način. Normalni serum određene vrste životinja inaktivira se na temperaturi od 56 °C tijekom 30 minuta od nespecifičnih antitijela. Zatim se razrijedi fiziološkom otopinom 1:100, 1:1000, 1:5000 i 1:10000, ovisno o titru naznačenom na naljepnici ampule s v. Specifičnim precipitirajućim serumom.

0,9 ml normalnog seruma svakog razrjeđenja pipetira se u Ulengutovljeve epruvete. Zatim se u svaku epruvetu s Pasteurovom pipetom doda 0,1 ml precipitiranog seruma. Slojeve možete dodavati jednom Pasteurovom pipetom počevši od maksimalnog razrjeđenja seruma.

Prikladnim za istraživanje smatra se taložna usta koja u razrjeđenju 1:10000 taloži protein sirutke iste vrste unutar 10 minuta i ne taloži se sa serumima drugih životinjskih vrsta u razrjeđenju 1:10000 za sat.

Iz istraženog mesa priprema se ekstrakt. Ispitni uzorak se pažljivo oslobodi od masnoće i vezivnog tkiva, kreda se drobi i stavlja u epruvetu; tu se dodaje fiziol
Za postavljanje reakcije taloženja pripremite nekoliko (4-7) redova malih epruveta, tri epruvete u nizu. Prve epruvete svakog reda ulije se u 0,9 ml ekstrakta iz ispitivanog mesa; u drugom - 0,9 ml fiziološke otopine i u trećem - isti volumen normalnih seruma različitih životinja u razrjeđenju 1: 1000.

U sve tri epruvete prvog reda doda se različitim Pasteurovim pipetama 0,1 ml seruma koji precipitira protein krave, u epruvetama drugog reda - 0,1 ml seruma koji taloži konjski protein, u epruvetama trećeg reda. - 0,1 ml taloženog svinjskog seruma, u epruvetama drugih redova - za istu količinu seruma od ovaca, koza, pasa.

Reakcija se očitava na tamnoj pozadini. Pozitivnom reakcijom smatra se kada se na mjestu dodira tekućina u prvim minutama nakon dodavanja precipitirajućeg seruma pojavi mutni bijeli prsten. Reakcija će biti specifična ako se u roku od 1 sata nakon dodavanja precipitirajućeg seruma u ekstrakt pojavi mutni bijeli prsten; kasnije nastali sedimenti smatraju se nespecifičnim.

Pozitivna reakcija u prvoj i trećoj epruveti istog reda pokazuje da ispitivano meso pripada životinji, što odgovara specifičnosti seruma. U svim ostalim redovima u prvim epruvetama reakcija bi trebala biti negativna. A u trećoj epruveti - pozitivno. U drugim epruvetama svih redova (kontrolni uzorak sa fiziološkom otopinom) reakcija mora biti negativna.

Na primjer, ako je ispitivani ekstrakt pripremljen od konjskog mesa, tada bi rezultat reakcije u svim epruvetama trebao biti sljedeći (tablica 14.).